2025-09-05 03:18:16
熒光檢測靈敏度:靈敏度高的儀器能夠檢測到低拷貝數的核酸模板,對于微量樣本的檢測至關重要。例如,一些儀器的熒光檢測下限可達到幾個拷貝數,適合于檢測罕見病原體或低表達基因。準確性和重復性:儀器的熱循環精度和熒光信號檢測的準確性直接影響實驗結果的可靠性。的儀器熱循環誤差應控制在較小范圍內,熒光信號檢測的變異系數(CV)較低,確保每次實驗結果的一致性。動態范圍:寬動態范圍的儀器能夠準確檢測不同濃度梯度的樣本,從低拷貝數到高拷貝數都能得到準確的定量結果,避免因樣本濃度過高或過低而出現檢測誤差。光學系統:如激發光源的強度和穩定性、熒光探測器的靈敏度和噪聲水平等。南京Texas Red熒光定量PCR儀有哪些
熒光染料法原理:一些熒光染料(如 SYBR Green I)能特異性地結合到雙鏈 DNA 上。在 PCR 反應體系中,隨著 DNA 擴增產物的不斷增加,與雙鏈 DNA 結合的熒光染料也越來越多,熒光信號強度與 PCR 產物的數量呈正相關。通過檢測熒光信號的強度變化,就可以實時監測 PCR 反應的進程。過程:在 PCR 反應的每一個循環中,當溫度降低到退火溫度時,引物與模板結合,DNA 聚合酶開始延伸引物,合成新的 DNA 鏈。此時,熒光染料會結合到新合成的雙鏈 DNA 上,儀器會在特定的時間點檢測熒光信號的強度。隨著循環次數的增加,熒光信號逐漸增強,當信號強度達到設定的閾值時,對應的循環數被稱為閾值循環數(Ct 值)。定量依據:在一定的范圍內,起始模板量與 Ct 值呈對數關系。即起始模板量越多,達到閾值所需的循環數越少,Ct 值越小;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通過已知濃度的標準品建立標準曲線,再根據待測樣本的 Ct 值,就可以在標準曲線上計算出其對應的起始模板量。南京 ROX熒光定量PCR儀直銷價受到儀器的整體性能、光學系統設計、熒光染料質量以及數據處理算法等多種因素的綜合影響。
熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對 PCR 產物進行標記跟蹤,實時監測反應過程的儀器。工作原理:在 PCR 反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個 PCR 進程。隨著 PCR 擴增的進行,每經過一個循環,熒光信號就會相應增加。通過檢測熒光信號的變化,就可以判斷 DNA 的擴增情況,進而實現對初始模板的定量分析。常用的熒光化學物質有 TaqMan 熒光探針和 SYBR 熒光染料等。TaqMan 探針法中,探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR 擴增時,Taq 酶的 5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號。SYBR Green Ⅰ 法中,SYBR 熒光染料特異性地摻入 DNA 雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與 PCR 產物的增加完全同步。
熒光定量 PCR 儀應用領域:醫學檢測病原體檢測:可快速準確地檢測血液、體液或組織樣本中的病原體 DNA 或 RNA,如乙肝病毒、丙肝病毒、病毒、等,為性疾病的早期診斷和防控提供有力支持。遺傳病診斷:檢測與遺傳性疾病相關基因的突變,輔助臨床診斷和遺傳咨詢,如囊性纖維化、血友病、地中海貧血等疾病的基因檢測。食品**:致病菌檢測:檢測食品中的沙門氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等致病菌,確保食品**。轉基因成分檢測:對食品中的轉基因成分進行定性和定量分析,保障消費者的知情權和選擇權。在一些熒光定量 PCR 儀的相關介紹中會提及對 TET 染料的支持。
熒光定量 PCR 儀的檢測結果會受到多種因素的影響,包括儀器設備、試劑質量、樣本處理以及實驗操作等方面,以下是具體介紹:引物和探針:引物和探針的特異性、純度及濃度對檢測結果影響明顯。若引物特異性不好,可能會與非目標序列結合,產生非特異性擴增,干擾目標基因的定量。探針的質量和標記效率也會影響熒光信號的強度和穩定性,進而影響檢測的準確性。酶的活性:Taq 酶等聚合酶的活性和穩定性是保證 PCR 反應順利進行的關鍵。酶活性過低會導致擴增效率低下,產量不足;而酶的穩定性差可能在反應過程中失活,使擴增反應中斷,影響結果的重復性和準確性。反應緩沖液:反應緩沖液的成分和 pH 值等條件對 PCR 反應有重要影響。不合適的緩沖液條件可能影響酶的活性、引物與模板的結合以及 DNA 的穩定性,從而導致擴增效果不佳,檢測結果不準確。結核分枝桿菌的檢測,傳統的培養方法需要數周時間;南京YELLOW熒光定量PCR儀廠家
與核酸結合特異性強、穩定性好的染料,可減少非特異性信號干擾。南京Texas Red熒光定量PCR儀有哪些
光學系統:包括光源、激發和發射濾光片、檢測器等。光源提供激發熒光染料所需的能量,濾光片用于選擇特定波長的光,檢測器負責檢測熒光信號的強度。如 ABI StepOne Plus 實時熒光定量 PCR 儀的光學系統能精確檢測不同熒光染料發出的信號。熱循環系統:用于控制 PCR 反應的溫度變化,包括變性、退火和延伸等步驟。它需要具備快速升降溫的能力,以保證 PCR 反應的高效進行。例如,Roche LightCycler 480 實時熒光定量 PCR 儀的熱循環系統升溫速度快,能有效縮短實驗時間。控制系統:負責儀器的操作和數據處理,可設置 PCR 反應的參數,如循環次數、溫度、時間等,還能對檢測到的熒光信號進行分析和處理,生成定量結果。南京Texas Red熒光定量PCR儀有哪些