2025-09-12 01:08:06
試劑兼容性:選擇與常用試劑品牌兼容性好的儀器,避免因試劑與儀器不匹配而導致實驗結果不穩定或無法進行。一些儀器廠家會提供配套的試劑,以保證實驗的比較好效果,如羅氏的熒光定量 PCR 儀與羅氏的 TaqMan 試劑配合使用,能發揮良好的性能。軟件功能:功能強大的軟件應具備實時監測、數據分析、結果可視化等功能,并且操作界面友好,易于上手。例如,儀器軟件能夠自動進行基線校正、閾值設定,還能進行基因表達差異分析、SNP 分型結果分析等。售后服務:考慮儀器制造商的售后服務質量,包括技術支持、維修保養、培訓服務等。良好的售后服務可以幫助用戶解決在使用過程中遇到的問題,確保儀器的正常運行。判斷食品是否含有轉基因成分以及轉基因成分的含量,保障消費者的知情權和選擇權。南京96孔熒光定量PCR儀一般多少錢
熒光標記探針法原理:使用一種特異性的熒光標記探針,它能與目標 DNA 序列雜交。探針的 5' 端標記有熒光報告基團,3' 端標記有熒光淬滅基團。在游離狀態下,報告基團發出的熒光會被淬滅基團吸收,無法檢測到熒光信號。當 PCR 反應進行時,DNA 聚合酶在延伸引物的過程中,會將探針水解,使報告基團與淬滅基團分離,報告基團發出的熒光信號就可以被儀器檢測到。每擴增一條 DNA 鏈,就會有一個探針被水解,釋放出一個熒光信號,熒光信號的強度與 PCR 產物的數量成正比。過程:在 PCR 反應的退火階段,熒光標記探針會與目標 DNA 序列特異性結合。在延伸階段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性會將探針從 5' 端開始逐個水解,使報告基團游離出來,產生熒光信號。儀器會在每個循環的延伸階段檢測熒光信號的強度,隨著 PCR 反應的進行,熒光信號逐漸增強,同樣可以得到 Ct 值。定量依據:與熒光染料法類似,通過標準品建立標準曲線,根據待測樣本的 Ct 值在標準曲線上計算出起始模板量。由于熒光標記探針具有特異性,能與特定的目標序列雜交,因此可以更準確地對目標基因進行定量分析,減少非特異性擴增的干擾。南京Cy5.5熒光定量PCR儀直銷價若溫度控制不準確,會導致 PCR 反應效率降低、特異性下降,產生非特異性擴增,影響熒光信號準確性;
VIC與 FAM 類似,是一種熒光報告基團,可標記在引物或探針上用于熒光定量 PCR。它在 PCR 過程中,隨著引物或探針與目標 DNA 的結合以及 PCR 產物的擴增,會發出特定波長的熒光,其熒光信號強度與 PCR 產物的量成正比,通過檢測熒光信號的變化來實現對目標 DNA 的定量分析。特點:激發波長和發射波長與 FAM 有所不同,激發波長約為 538nm,發射波長約為 554nm,熒光顏色為黃綠色。VIC 常用于多重熒光定量 PCR 中,可與 FAM 等其他熒光染料同時使用,實現對多個不同目標基因的同時檢測,因為其光譜特性與其他染料有較好的區分度,能避免熒光信號之間的相互干擾。
FAM并不是一種特定的熒光定量PCR儀品牌或型號,而是一種在熒光定量PCR中常用的熒光染料。FAM(Fluoresceinamidite)即羧基熒光素,具有高量子產率,在被特定波長的光激發后會發出強烈的綠色熒光,其激發波長通常在495nm左右,發射波長在520nm左右。由于其熒光特性穩定且靈敏,被廣泛應用于熒光定量PCR實驗中,作為報告分子來對目標DNA或RNA進行定量檢測。很多熒光定量PCR儀都可以使用FAM染料進行檢測,例如賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABIStepOnePlus等。這些儀器通常配備有能激發FAM染料發光的光源以及能檢測其發射熒光的光學系統。以QuantStudio?1Plus實時熒光定量PCR儀為例,它配備4種常用的激發和發射濾光片,包括FAM、VIC、ROX和Cy5,其激發光源為白光LED,激發范圍為455至530nm,可滿足FAM染料的激發需求。染料的純度、熒光量子產率及與核酸的結合特性等很重要。
以下是一些判斷熒光定量 PCR 儀光路系統是否需要校準的方法:熔解曲線異常峰形改變:熔解曲線的峰形變得不規則、寬化或出現多個峰,而樣品和實驗條件均無變化時,可能是光路系統對熒光信號的檢測精度下降,導致熔解曲線的分析結果不準確,此時需要考慮對光路系統進行校準。Tm 值偏移:熔解曲線的 Tm 值(解鏈溫度)與預期值相比出現明顯偏移,且排除了引物設計、反應條件等因素的影響,可能是光路系統的熒光檢測存在誤差,影響了對 DNA 雙鏈解鏈過程的準確監測,需要對光路進行檢查和校準。核酸完整性:完整的核酸才能保證 PCR 反應正常進行。南京JOE熒光定量PCR儀
與核酸結合特異性強、穩定性好的染料,可減少非特異性信號干擾。南京96孔熒光定量PCR儀一般多少錢
熒光定量PCR儀的檢測結果會受到多種因素的影響,包括儀器設備、試劑質量、樣本處理以及實驗操作等方面,以下是具體介紹:儀器設備因素熱循環系統:熱循環的準確性和均勻性至關重要。如果熱循環過程中溫度控制不準確,如實際溫度與設定溫度存在偏差,會導致PCR反應效率不穩定,影響擴增產物的產量和質量,進而使檢測結果不準確。不均勻的溫度分布會使不同反應孔之間的擴增效果產生差異,增加實驗誤差。熒光檢測系統:熒光檢測的靈敏度和準確性直接影響結果。儀器的光學部件性能不佳,如激發光源強度不足、熒光信號收集效率低,可能導致弱熒光信號無法被準確檢測到,影響對低拷貝數模板的定量分析。此外,熒光檢測通道之間的串擾也會干擾信號的準確測量,造成結果偏差。南京96孔熒光定量PCR儀一般多少錢